负载人脂肪间充质干细胞外泌体的人脱细胞羊膜对小鼠全层皮肤缺损创面愈合的影响

doi:10.3877/cma.j.issn.1673-9450.2026.03.007

中华损伤与修复杂志(电子版) ›› 2026, Vol. 21 ›› Issue (03) : 208 -215. doi: 10.3877/cma.j.issn.1673-9450.2026.03.007

论著

负载人脂肪间充质干细胞外泌体的人脱细胞羊膜对小鼠全层皮肤缺损创面愈合的影响

赵彬¹^,², 周俊鹏¹, 王芳¹, 张伟¹, 杨晨¹^,^†(

)

¹　710077　西安医学院第一附属医院烧伤整形美容外科
²　710032　西安，空军军医大学第一附属医院烧伤与皮肤外科

收稿日期:2026-01-06 出版日期:2026-06-01
通信作者: 杨晨
基金资助:
国家卫生健康委能力建设和继续教育中心慢病管理研究课题(GWJJMB202510025153); 西安医学院第一附属医院科研启动经费项目(XYYFY-2023-10); 西安市科技计划项目(23YXYJ0164)

Effects of human acellular amniotic membrane loaded with human adipose-derived mesenchymal stem cell-derived exosomes on full-thickness skin defect wound healing in mice

Bin Zhao¹^,², Junpeng Zhou¹, Fang Wang¹, Wei Zhang¹, Chen Yang¹^,^†()

¹ Department of Plastic， Burn & Medical Cosmetic Surgery， the First Affiliated Hospital of Xi'an Medical University， Xi'an 710077， China
² Department of Burns and Cutaneous Surgery， the First Affiliated Hospital of Air Force Medical University， Xi'an 710032， China

Received:2026-01-06 Published:2026-06-01
Corresponding author: Chen Yang

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引用本文：

赵彬, 周俊鹏, 王芳, 张伟, 杨晨. 负载人脂肪间充质干细胞外泌体的人脱细胞羊膜对小鼠全层皮肤缺损创面愈合的影响[J/OL]. 中华损伤与修复杂志(电子版), 2026, 21(03): 208-215.

Bin Zhao, Junpeng Zhou, Fang Wang, Wei Zhang, Chen Yang. Effects of human acellular amniotic membrane loaded with human adipose-derived mesenchymal stem cell-derived exosomes on full-thickness skin defect wound healing in mice[J/OL]. Chinese Journal of Injury Repair and Wound Healing(Electronic Edition), 2026, 21(03): 208-215.

目的

探讨负载人脂肪间充质干细胞（ADSCs）外泌体（Exos）的人脱细胞羊膜（HAAM）对小鼠全层皮肤缺损创面愈合的影响及其潜在作用机制。

方法

从抽脂手术获取的脂肪组织中分离ADSCs，从ADSCs中提取Exos并鉴定；从来源于胎盘的羊膜组织中分离羊膜制备HAAM并表征。取33只BABL/c小鼠，于背部制备全层皮肤缺损模型。其中9只小鼠皮肤缺损处予以HAAM补片缝合，分别于术后第3、7、14天通过组织切片Ⅳ型胶原荧光染色评估HAAM的生物降解情况。将其余24只小鼠分为对照组、HAAM组、Exos组和Exos/HAAM组，每组6只。对照组创面不作处理，HAAM组创面覆盖HAAM补片，Exos组创面使用100 μg ADSCs-Exos，Exos/HAAM组创面覆盖含100 μg ADSCs-Exos的HAAM补片。分别于术后第7、14天，通过形态学观察和组织学苏木精-伊红（HE）染色及Masson染色评估创面愈合程度；于术后第14天使用细胞因子抗体微阵列检测小鼠创面组织趋化因子表达的变化。

结果

成功分离并鉴定ADSCs-Exos。扫描电子显微镜下HAAM支架呈疏松多孔结构。荧光染色结果显示，术后第14天HAAM已大部分降解。小鼠皮肤创面模型实验显示，术后第7天Exos/HAAM组创面愈合率显著高于其他组；HE染色结果显示，术后第7天Exos/HAAM组上皮化优于其他组；Masson染色结果显示，术后第14天Exos/HAAM组胶原含量高于其他组；细胞因子抗体微阵列检测结果显示，术后第14天Exos/HAAM组叠加了HAAM组和Exos组趋化因子的表达。

结论

Exos/HAAM复合物支架可增加小鼠创面组织趋化因子的表达，促进皮肤创面愈合。

关键词: 外泌体, 创面修复, 脂肪间充质干细胞, 脱细胞羊膜

Objective

To investigate the effects and the potential mechanism of a composite scaffold constructed by human acellular amniotic membrane （HAAM） loaded with exosomes from adipose-derived mesenchymal stem cells （ADSCs-Exos） on full-thickness skin defect wound healing in mice.

Methods

ADSCs were isolated from adipose tissue obtained by liposuction， and ADSCs-Exos were collected and characterized. HAAM was prepared from placental amniotic tissue and characterized. Thirty-three BALB/c mice were selected to establish dorsal full-thickness skin defect models. In 9 mice, HAAM patches were sutured to the skin defects. The biodegradation of HAAM was evaluated by type Ⅳ collagen immunofluorescence staining of tissue sections on postoperative days 3, 7, and 14. The remaining 24 mice were divided into control group， HAAM group， Exos group， and Exos/HAAM group， with 6 mice per group. The control group received no treatment； the HAAM group was covered with HAAM patch； the Exos group was treated with 100 μg ADSCs-Exos； and the Exos/HAAM group was covered with HAAM patch containing 100 μg ADSCs-Exos. Wound healing was evaluated by morphological observation， hematoxylin-eosin （HE） staining， and Masson staining on days 7 and 14 post-surgery. Cytokine antibody microarray was performed on day 14 to detect the expression changes of chemokines at the wound site.

Results

ADSCs-Exos were successfully isolated and identified. Scanning electron microscopy revealed a loose and porous structure of the HAAM scaffold. Immunofluorescence staining revealed that the HAAM had largely degraded by day 14 post-surgery. In the mice wound model， the Exos/HAAM group exhibited significantly higher wound healing rate on day 7 post-surgery compared to other groups. HE staining showed that the epithelialization in the Exos/HAAM group was better than that in other groups on day 7 post-surgery. Masson staining demonstrated that collagen content in the Exos/HAAM group was higher than that in other groups on day 14 post-surgery. Cytokine antibody microarray analysis indicated that the Exos/HAAM group exhibited superimposed expression of chemokines from both HAAM group and Exos group on day 14 post-surgery.

Conclusion

The Exos/HAAM composite scaffold promotes chemokine expression in wound tissue and accelerates wound healing in mice.

Key words: Exosomes, Wound repair, Adipose-derived mesenchymal stem cells, Acellular amniotic membrane

图1 ADSCs-Exos的特征。A示扫描电子显微镜下ADSCs-Exos的形态； B示蛋白质印迹法检测，Exos标志物CD81、CD9和CD63阳性表达注：ADSCs为脂肪间充质干细胞；Exos为外泌体

图2 HAAM的特征。A示完整羊膜HE染色（×40）显示存在大量细胞核，其中基底上层为上皮样干细胞，基底层绒毛膜内含间充质干细胞； B示 HAAM 的HE染色（×40）显示几乎无细胞残留； C示扫描电子显微镜下完整羊膜基底层上侧分布扁平铺路石样上皮细胞；D示HAAM上皮细胞已被清除，基质侧胶原纤维呈现疏松多孔，未见基质细胞注：HAAM为人脱细胞羊膜

图3 扫描电子显微镜下Exos/HAAM复合物支架的形态注：Exos为外泌体；HAAM为人脱细胞羊膜

图4 采用Ⅳ型胶原荧光染色检测HAAM的生物降解特性。A示术后第3天组织切片Ⅳ型胶原荧光染色；B示术后第7天组织切片Ⅳ型胶原荧光染色；C示术后第14天组织切片Ⅳ型胶原荧光染色注：HAAM为人脱细胞羊膜

图5 术后第7、14天各组小鼠皮肤创面愈合情况注：HAAM为人脱细胞羊膜；Exos为外泌体

表1 不同时间点各组小鼠创面愈合率比较（%，

x ¯

±s）

组别	样本数	术后第7天	术后第14天
对照组	3	39.5±5.1	82.3±3.8
HAAM组	3	44.2±4.8	85.6±4.1
Exos组	3	54.3±3.9^a	89.7±6.7^a
Exos/HAAM组	3	74.6±4.7^{b， c，d}	98.6±1.8^{b， c，d}
F值		39.3	12.2
P值		<0.001	0.002

表1 不同时间点各组小鼠创面愈合率比较（%，

x ¯

±s）

组别	样本数	术后第7天	术后第14天
对照组	3	39.5±5.1	82.3±3.8
HAAM组	3	44.2±4.8	85.6±4.1
Exos组	3	54.3±3.9^a	89.7±6.7^a
Exos/HAAM组	3	74.6±4.7^{b， c，d}	98.6±1.8^{b， c，d}
F值		39.3	12.2
P值		<0.001	0.002

图6 采用HE染色（×20）分析各组小鼠皮肤创面组织上皮化情况注：HAAM为人脱细胞羊膜；Exos为外泌体

图7 采用Masson染色（×20）分析各组小鼠皮肤创面组织胶原含量变化注：HAAM为人脱细胞羊膜；Exos为外泌体

图8 术后第14天各组小鼠创面组织趋化因子表达情况注：HAAM为人脱细胞羊膜；Exos为外泌体

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