目的 研究高糖环境下成纤维细胞分泌CXC趋化因子配体11(CXCL11)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)迁移的作用及其机制。
方法 取华中科技大学同济医学院附属梨园医院创面修复科2021年8月收治的1例糖尿病足溃疡(DFU)患者和该院手外科 2021年9月收治的1例急性足外伤患者创缘皮肤组织,行单细胞转录组测序,分析成纤维细胞亚群中趋化因子配体与血管内皮细胞亚群中趋化因子受体的相互作用。纳入2022年1月至2024年12月武汉市第三医院内分泌科DFU患者和该院烧伤科急性足外伤患者各3例,取其石蜡包埋组织样本,采用免疫组化染色观察创缘皮肤组织中CXCL11及CXC趋化因子受体7(CXCR7)的表达。取正常人包皮成纤维细胞(HFF-1)和经D-葡萄糖处理后的高糖HFF-1细胞,分别为正常组和高糖组,收集2组培养48 h后的上清液作为正常条件培养基(NFs-CM)和高糖条件培养基(GFs-CM)。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测正常组和高糖组细胞中CXCL11 mRNA表达水平。取HUVECs分为完全培养基组(CPM组)、NFs-CM组和GFs-CM组,行划痕实验计算划痕后12、24、36 h细胞迁移率。采用蛋白质印迹法检测CPM组、NFs-CM组和GFs-CM组HUVECs处理36 h后的CXCR7蛋白表达水平。利用CXCL11中和抗体处理HUVECs,实验分为6组:CPM组、CPM+anti-CXCL11组、NFs-CM组、NFs-CM+anti-CXCL11组、GFs-CM组和GFs-CM+anti-CXCL11组,重复划痕实验。所有实验分别重复3次。对数据行单因素方差分析(ANOVA)、Tukey's检验和t检验。
结果 与急性足外伤患者足背创缘皮肤组织比较,DFU患者创缘皮肤组织成纤维细胞亚群中趋化因子配体CXCL11与血管内皮细胞亚群中趋化因子受体CXCR7的相互作用明显增强,CXCL11及CXCR7蛋白表达水平显著升高(t=25.870、18.150, P<0.001)。与正常组比较,高糖组HFF-1细胞中CXCL11 mRNA表达水平显著升高(t=8.412,P=0.001)。划痕后36 h,GFs-CM组HUVECs细胞迁移率显著低于CPM组和NFs-CM组(P<0.001)。蛋白质印迹分析显示,GFs-CM组CXCR7蛋白表达水平显著高于CPM组和NFs-CM组(P<0.001)。划痕后12、24、36 h,与GFs-CM组比较,GFs-CM+anti-CXCL11组HUVECs细胞迁移明显增强(P<0.05)。
结论 高糖促进HFF-1细胞分泌CXCL11,其细胞培养上清液抑制HUVECs迁移并上调CXCR7蛋白表达;外源性添加CXCL11中和抗体可增强HUVECs迁移能力。